Proyecto Mcrobiologia

Introducción

Francesco Redi nos enseñó la importancia de los factores externos que impactan e influyen el producto de muestras que están expuestas al ambiente externo. Louis Pasteur explicó que los microorganismos crecen en la comida y como pueden ser patogénicos dependiendo en la condiciones en las cuales se mantiene las muestras. Pero, lo que tiene más impacto en el producto de cualquier alimento es el proceso metabólico que sucede.

Es importante incorporar las teorías de Redi, porque una condición que utiliza oxígeno del ambiente, se está exponiendo a factores externos que pueden influir en el crecimiento de la muestra. Por ejemplo, moscas que tiene acceso a parase en la muestra. También, Pasteur reveló que los  microorganismos se pueden eliminar o reducir si las condiciones de temperatura son controladas. Con esta información de Pasteur, la fermentación fue explicada.

La fermentación es un procesos metabólico que ocurre naturalmente y lo utilizamos para producir productos que podemos consumir. No siempre es deseable tener un producto fermentado, porque hay productos de la fermentación (ej. salmonella y E. Coli) que son patogénicos a los humanos. Por ende las condiciones se tienen que controlar para obtener los productos deseados. Igualmente, es importante analizar los reactivos, ya que tienen efecto en el tipo de proceso de metabolismo y en los productos que son resultado estos procesos. Se puede hipotetizar que hay diferentes procesos que se realizan dependiendo en las condiciones y reactivos del experimento.

Objetivos

•El objetivo de este experimento es  entender y analizar los efectos de condiciones y sus variables en un muestra de comida relacionado con las rutas metabólicas vistas en clase.

•Observar que tipos de microorganismos crecen en nuestro experimento.

•Observaremos que factores son los que aceleran la descomposición de los alimentos.

•¿Cómo influye el almacenamiento de los alimentos en su descomposición?

•¿Cuáles son los efectos de consumir alimentos descompuestos?

 Materiales

Los siguientes materiales se eligieron por qué es lo que teníamos disponible y podríamos observar con mayor facilidad al microorganismo que creció dentro de nuestro alimento.

❏      2 Hieleras

❏     Hielo

❏     Parafilm

❏     Placas de Petri (16)

Fuentes de Carbono

Lo siguiente fue elegido porque se quiso realizar un experimento con consumos ordinarios y comunes. El consumo de lo siguiente es típico entre la comunidad de Cholula y en México. Los productos fueron muy accesibles para conseguir y económicos, pero la accesibilidad y lo económico no siempre corresponde con la misma calidad. Por eso es interesante saber que tipo de microorganismo crece  en la comida que consumimos.

·  Esquites

o   Elote y caldo de elote

o   Mayonesa

o   Queso

o   Chile de polvo

o   Limón

·  Tacos

o   Tortilla

o   Carne de puerco adobada

o   Cilantro

o   Cebolla

o  Piña

Proceso

El proceso inoculación abarcó 12 días, e hicimos tinciones el último día.

Fuimos por nuestras muestras a sus lugares de venta, siendo tacos al pastor y esquites. Luego separamos las muestras en 16 cajas Petri siguiendo la siguiente tabla, para que las muestras se encontrarán en distintos ambientes controlados.

Se buscaron diferentes maneras para que cada muestra estuviera en su ambiente en cuestión.

En los ambientes que se tenían que encontrar en 4°C los mantuvimos en un baño de hielo donde regulamos la temperatura y cambiabamos el hielo cuando fuese necesario, en los condiciones donde se tenía que mantener sin contacto con el ambiente se le puso parafilm a las cajas petri. para las muestras que necesitaban estar en oscuridad las mantuvimos dentro de un cajón donde se abrió únicamente para cambiar los hielos si aplicaba para la muestra.

Antes de teñir, se debe observar las estructuras con un microscopio compuesto y un microscopio óptico y anotar lo observado.

Para fijar bacterias a Porta objetos, con tu asa coloca una muestra pequeña y esparcela en tu cubreobjetos, para fijarla utilizaremos calor usando el mechero y pasando el portaobjetos sobre la llama sin quemar tu muestra.

Tinción de Gram

1.    Pon una gota de Cristal violeta por un minuto

2.    Lavar con agua destilada

3.    Agregar una gota de iodine/ lugol por un minuto

4.    Lavar con agua destilada

5.    Lavar con una gota de alcohol por aproximadamente 4 segundos

6.    Lavar con agua destilada

7.    Agregar una gota de safranina de 30 segundos a un minuto

8.    Lavar con agua destilada

9.    Cubrir con cubreobjetos

Tinción con Azul de Acetileno

1.    Agregar una gota de azul de azul de Acetileno

2.    Lavar con agua destilada

3.    Cubrir con porta objetos

La tinción de Gram se usa para bacterias y la tinción con azul de metileno se utiliza en hongos, para esta práctica se usaron E. Coli, S. aveus (las cuales se tiñen utilizando la técnica de Gram), levadura, y aspergillus (los cuales se tiñen con azul de metileno).

Al terminar las tinciones observa e identificar los microorgaismos y anotar si son bacterias gram positivas o negativas y observar y anotar lo observado.

Conclusiones

Dentro de las tres variables que se controlaban hubo prioridades en cuestión de importancia en que influyen en el crecimiento, a continuación se explican el porqué y el nivel de cada una:

  1-Cantidad de Luz: Esta caracteristica es de suma importancia ya que si le da demaciada luz a las muestras se pueden llegar a secar (las que tenían O2) o a empañar (las que no tenían acceso a más O2) ocasionando grandes cambios en el crecimiento y rapidez del mismo.

  2- Cantidad de O2: Esta variable sí generaba cambios en los crecimientos y rapidez aunque no eran tan drásticos como en el caso de la luz, estos cambios se debe a que  permitía la entrada muy pocas partículas.

  3- Temperatura: El efecto de la temperatura prácticamente no influyó en el crecimiento y rapidez de microorganismos en las muestras.   

Entre todas las muestras se observaron dos tipos de organismos básicamente, hongos y bacterias. Ambos viéndose altamente controlados e influenciados por la humedad del medio. donde se encontraron bacterias se cree que estaba sucediendo el proceso de fermentación propiónica ya que tenían un ligero olor a ácido (posiblemente ácido propiónico). 

Si se ingieren alimentos en descomposición puede que el cuerpo reaccione de una manera agresiva o anormal ya que entrara un patógeno al organismo para atacar provocando un desequilibrio metabólico.

La condición en la cual se genero el mejores resultados fue la condición #6 de esquites y la condición #1 de tacos y esquites. La 6 se produjeron crecimientos muy variados, pero fue resultado de que añadimos agua para que el esquite no se encontrara completamente seco.

¿Hay diferencias en el crecimiento? ¿Por qué?

Se pueden observar diferencias principalmente en las muestras en las cuales se generaron microorganismos anaerobios y las que generan crecimientos aerobios, como se pudo observar en las muestras #1 y #5 de tacos, hay crecimientos muy similares aunque solo cambio la temperatura de estas muestras se puede ver que hubo un crecimiento más rápido ya que está más poblado uno que otro. Lo cual indica una temperatura más favorable para que estos organismos crezcan

¿Cómo es que cada variable influye (luz, T, O2) en estas diferencias?

Cada variable favorece el crecimiento de distintos microorganismos, dentro de nuestras muestras encontramos que las variables más favorables fueron las anaerobias, que se encontraban con poco luz, y fue muy subjetivo entre las distintas temperaturas, esto se pudo haber producido por algún error en la experimentación. La luz puede influir si el microorganismo es una cianobacteria y necesita de esto para crear energía pero como las bacterias y hongos no necesitan de esto por el tipo de medio de cultivo.  La temperatura también influye mucho en el crecimiento de cada bacteria solo que normalmente las bacterias se cultivan en una temperatura de alrededor de 37°C para obtener un crecimiento óptimo. Y el O2 es una variable muy importante ya que esta nos indica que tipo de ruta metabólica toma la bacteria. ya que puede estar en una fermentación, etc…